牛冷凍精液的保存及使用   MVE液氮罐

精液冷凍保存是將精液進行特殊處理，保存在超低溫下，以達(dá)到長期保存的目的。通常采用液氮(—196℃)和干冰(—79℃)保存。其最大優(yōu)點是可長期保存，使用不受時間、地域以及種用雄性動物壽命的限制。可充分提高公牛的利用率?，F(xiàn)將冷凍精液保存起來和怎樣進行解凍及給母牛輸精的有關(guān)技術(shù)操作介紹如下，供參考。

一、稀釋液的配方：

12%的蔗糖液75毫升、甘油5毫升、卵黃液20毫升。

二、稀釋方法：

將經(jīng)過檢查合格的精液(活力0?6以上、精子密度中等)按1：2—5倍稀釋液進行稀釋，其稀釋原則應(yīng)保證每個顆粒精液中所含精子數(shù)不少于3000—4000萬個，解凍后呈直線前進運行的精子不少于1500萬個。

三、冷凍：

在裝有液氮的容器上置一銅紗網(wǎng)，距液氮面2厘米左右，使溫度維持在—80℃至—100℃。將平衡后的精液用滴管按一定量(0?1毫升)滴于銅紗網(wǎng)、滴完最后一滴停3—5分鐘后，當(dāng)精液顆粒顏色變白時，立即浸入液氮，并將全部顆粒取下，收集于貯精瓶或紗網(wǎng)布袋內(nèi)，并做好標(biāo)記，然后立即移入液氮罐中貯存。

四、解凍：MVE液氮罐

將預(yù)先配制好的2?9%檸檬酸的溶液1毫升，放入干凈的小試管中，再置于40℃左右的溫水杯中，迅速取顆粒冷凍精液1粒放入試管。輕輕搖動至化凍時，從水杯中取出試管，接著檢查精液活力，不低于0?3即為合格品。

五、重視保精、快速解凍與鏡檢

1、根據(jù)液氮罐的性能要求，定期添加液氮罐內(nèi)盛裝凍精的提筒不能露在液氮面外。

2、取精時，盡可能用長鑷子，切勿將提筒或紗布袋提到臨界線以上處(罐頂10厘米左右)。

3、從液氮中取出細(xì)管凍精時，要輕輕甩1—2下，將塑料細(xì)管的棉塞端放入35—40℃的溫水中，把封口端留在水外1—1?3厘米外，待管內(nèi)精液融化一半時，立即取出備用。

4、解凍后的精液鏡檢時，精子的活力不低于0?3方可用于輸精，才能確保正常受精。

5、解凍后的精液應(yīng)立即輸配，不宜停放時間過長，應(yīng)做到現(xiàn)解凍、現(xiàn)輸精。

六、適時輸精  MVE液氮罐

母牛正常排卵是在發(fā)情結(jié)束后6—12小時，精子在母牛生殖道的存活時間為12—20小時，且還需要4—6小時的獲能過程，才能與卵子結(jié)合受精。精子15分鐘就會到達(dá)輸卵管受精部位，因此，讓精子早于卵子到達(dá)輸卵管受精部位是提高受胎率的先決條件。

1、適宜的輸精時間：是在母牛的發(fā)情后期。此時母牛表現(xiàn)：精神平穩(wěn)，******部腫脹消失，****不再流出透明液體。直腸檢查卵泡脹大，表面緊張，有一觸即破之感。此時為最佳輸精時機。

2、適宜的輸精部位：是在子宮頸內(nèi)口1厘米處即子宮體基部，過淺易導(dǎo)致精液外流，過深易損傷子宮內(nèi)粘膜。

3、適宜的輸精方法：直腸把握子宮頸輸精法。將母牛保定，左手插入母牛直腸輕輕握住子宮頸后端，右手將輸精器自陰門向斜上方緩慢插入5—10厘米(以避開尿道口)再改為平插送到子宮頸口，緩慢越過子宮頸管中的皺壁，到達(dá)子宮頸基部，徐徐注入精液后，緩緩抽出輸精器。

4、適宜的輸精次數(shù)：以1—2次為宜?？稍诎l(fā)情母牛發(fā)情高潮后，黃牛在發(fā)情高潮后6—12小時，水牛在發(fā)情高潮后18—20小時進行第一次輸精，前后間隔8—12小時再進行第二次輸精。